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　　相关医学讨论探究：肺癌指标的磁珠检测 抑癌基因p53的突变在恶性肿瘤中相当常见，其突变后大量表达的突变型p53蛋白，可引起机体自身的免疫应答，产生针对 p53蛋白的自身抗体，对于肺癌的辅助诊断、预后、 I临床监测和免疫治疗有重大意义。然而，目前检测 p53抗体的方法则很不理想，例如ELISA 方法，时间冗长、步骤复杂、而且是半定量的。应用IMB电化学发光方法(IM-ECI )可以定量方便地检测肺癌患者血清中的p53抗体浓度。Yan等I2 等利用俘获了p53蛋白的IMB和能够检测到的一抗二抗联合形成磁珠复合体，并结合ECL来测定肺癌患者血清中的p53抗体浓度。www.zgfa120.cn

　　结果显示应用IM-ECL检测到肺癌患者中的p53抗体阳性率为28.6 ，和EI ISA 的24%阳性率接近。但是，IM—ECL较之ELISA法有明显的优越性：① 能够重复检测患者血清中的 p53抗体;② 能够检测的最低浓度为10pg/ml;③ 能够在1小时内完成检测。IM-ECI 为肺癌的监测提供了很好的实验室手段。 2.2 肺癌患者循环癌细胞的检测 近年来发现部分无I临床转移征象的早期肺癌患者其实已有远处转移一 ，这和肿瘤的隐性微转移(occult micro metastases)或循环癌细胞(circulating tumor cells， CTCs)密切相关。但是常规病理技术无法确定存在于血液、骨髓、淋巴结的微转移灶。目前研究较多的检测肺癌 CTCs的方法有RT-PCR 和免疫细胞化学染色 (ICC)法。RT-PCR法敏感性高特异性低。ICC法具有较高的特异性，但由于进入血循环中的肺癌细胞极其少量，因此单纯ICC法无法对早期肺癌患者 CTCs进行检测。 IMB法为肿瘤生物诊断提供了先进的分离手段，它能够从外周血中快速、灵敏、简便地检测出早期肺癌患者的CTCs，从而早期发现肺癌患者的隐性转移，检测复发和转移，评估预后以及指导治疗。 2.2.1 IMB 法检测非小细胞肺癌CTCs Gauthier等：妇利用抗上皮细胞膜抗原的抗体Ber— EP4包被的IMB从外周循环单核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMC)中富集上皮细胞。内容来自肺癌公共医学网转载请注明www.zgfa120.cn

　　然后应用端粒重复序列扩增(TRAP)一酶联免疫吸附法(ELISA)测量这些富集的上皮细胞。结果显示，从30例健康志愿者富集的上皮细胞中没有检测到端粒酶的活性，从15例ⅢB或Ⅳ期非小细胞肺癌 (NSCLC)患者富集的上皮细胞中检测到11例 (73%)端粒酶活性呈阳性。利用IMB结合TRAP— ELISA这种方法检测肺癌患者外周血中端粒酶活性阳性的细胞具有很好的特异性以及敏感性。由于激活的淋巴细胞常规状态下也能表达端粒酶，故不能直接检测血标本中的端粒酶。用Ber—EP4包被磁珠富集外周血中的上皮细胞再检测端粒酶就能克服这一点。同时用这种技术方法能从lOml的外周全血富集的上皮细胞中检测出大约12个端粒酶活性阳性的细胞，表明该法能够检测出极其少量的 CTCs。 Wang等 应用纳米IMB技术结合ICC法检测早期NSCI C患者的CTCs。NSCLC为上皮源性的肿瘤细胞，故能够表达特异性标志物细胞角质蛋白(cytokeratin，CK)。利用这点，应用抗CK7/8单克隆抗体包被纳米磁珠来富集早期肺癌患者周围血中极少量的肿瘤细胞，然后应用ICC法，对经纳米 IMB浓缩出的肿瘤细胞或异位上皮细胞进行免疫染色，最后在光镜下直接观察CK 阳性细胞。15例早期NSCI C标本单纯应用ICC法均未检测到CK 阳性细胞，但应用纳米IMB+ICC法后，有5例标本检测到了CK阳性细胞，其阳性检出率和巢式RT— PCR无明显差异，而假阳性率低于巢式RT—PCR。 2.2.2 IMB分离小细胞肺癌(SCI C)CTCs 在以往的纵向研究中常用流式细胞仪计数小细胞肺癌患者外周血的肿瘤细胞，但是只有1 的肿瘤细胞在进入外周循环24小时后仍具有活性，0.1 的肿瘤细胞具有远处侵袭性 ，故有必要分离这些肿瘤细胞进一步检测其活性和功能。Kularatne等 利用 IMB法来分离CTCs。SCI C患者外周血标本中的肿瘤细胞用特异性抗体Ber—EP4标记，通过包被了二抗的IMB和Ber—EP4的结合再来分离CTCs。流式细胞仪计数和IMB分离方法可以观测SCI C患者化疗过程中CTCs变化情况，从而观察疗效、判断预后。www.zgfa120.cn

　　IMB法在生物医学领域的应用越来越广泛，尤其在肿瘤学中的研究和应用更是令人瞩目。将这一新颖而实用的技术带入到肺癌的研究中，能够对肺癌的辅助诊断、预后、临床监测和免疫治疗产生重大的影响。目前IMB真正广泛应用到肺癌的研究治疗，还需要解决一些技术瓶颈：①免疫磁珠制备的难度较大。要获得均一、球形、超顺磁性且易于结合蛋白的磁珠很难，国内目前较少且还未进入批量生产，而国外大多为专利产品，价格昂贵;②现自然界中仅存在两种细胞(红细胞和磁活性菌)，因其内在磁场可直接通过外加磁场分离，绝大部分细胞必须通过抗体作为耦联配体与磁珠形成复合物后分离，虽然单克隆抗体技术突飞猛进，但仍没有特异性和敏感性都令人满意的肺癌单克隆抗体，这无疑会影响肺癌细胞的检测分离效率;③ 磁导向治疗是一种新颖的靶向治疗方式，已经在肝癌患者身上取得了初步的疗效，但是以IMB作为载体的化疗药物进入体循环后往往被网状内皮系统(RES)的巨噬细胞所吞噬，药物主要分布在肝、脾和骨髓等网状内皮细胞较丰富的器官中，导致对肺癌等实体肿瘤疗效欠佳。相信随着各学科不断交叉互动，这些技术瓶颈一定会被打破，IMB法将给更多的肺癌患者带来希望。 (版权归属原作者所有)内容来自肺癌公共医学网转载请注明www.zgfa120.cn