肺癌公共医学网

　　相关医学讨论探究：本研究采用Invitrogen公司的BLOCK-iT Lentiviral RNAi Expression System，构建用于慢病毒包装的shRNA表达质粒 pLenti6-HIFlot，通过4种质粒共转染HEK293FT细胞的方法产生复制缺陷型的慢病毒。定量RT-PCR方法直接测定上清中病毒RNA分子拷贝数。转导SPCA1和A549后经Blas. ticdin筛选的克隆计数法计算功能滴度。然后用1 MOI的病毒转导SPCA1和A549细胞，经Blasticdin 10 g/ml筛选 HIF-lot基因沉默的细胞系。定量RT-PCR方法测定常氧和 0.5%O 条件下筛选细胞和其父代细胞HIF-lot表达水平来证实。实验结果显示，目的片段正确地插人pRNTR/U6产生 pENTR/U6-HIFlot质粒。每10 cm培养板可生产病毒的 RNA拷贝数为(4.2±0.4)×10 copies。转导SPCA1和 A549细胞的功能滴度分别为3.5×10。TU/ml和2.5×10。 TU/ml。筛选SPCA1和A549细胞与其父代细胞相比，常氧条件下在形态、增殖能力方面无明显区别。筛选SPCA1和 A549细胞在常、乏氧条件下HIF-lotmRNA水平只有对照细胞的8.4% 、9.3% 和11.1% 、7.4% ，mRNA水平约下降 90% 。www.zgfa120.cn

　　HIF是肿瘤细胞适应乏氧环境的调控核心，HIF-lot又是乏氧时HIF家族中升高最显著的因子，抑制HIF.1仅的活成为干扰肿瘤乏氧应答的一个主要途径。文献报道采用热休克蛋白Hsp90特异抑制剂苯醌及其衍生物、YC-1、组氨酸脱乙酰酶抑制剂FK228、PI3K抑制剂LY294002和FRAP抑制剂rapamycin等药物抑制HIF-lot转录活性并降解HIF-lot 蛋白，减少肿瘤血管的生成，具有显著的抗肿瘤作用。RNAi 是抑制基因表达的有力工具。目前，利用RNAi在白血病、艾滋病、乙型肝炎的治疗研究已取得一定进展，成功地下调了相关基因的表达。三位一体疗法效果好www.zgfa120.cn

　　采用RNAi技术下调HIF-lot基因在肿瘤细胞的表达，进而阻断乏氧时HIF.1ot的应答性升高，联合其他手段可以有效地消灭乏氧的肿瘤细胞。为验证此假设，本实验构建HIF.1仅RNAi慢病毒载体系统，建立稳定的HIF-1仅基因沉默细胞株，并证实该系统可以稳定地介导肺癌细胞的 RNAi作用，下调HIF.1ot基因的表达水平90%左右。本研究正更深人地研究该细胞株乏氧条件下的增殖、凋亡、细胞因子分泌、对射线和药物的敏感性等生物学行为，分析HIF-lot 作为治疗靶的可行性。 (版权归属原作者所有)内容来自肺癌公共医学网转载请注明www.zgfa120.cn