文章讨论： 前期工作中,我们设计合成siRNA2Med19慢病毒载体,可以稳定地表达siRNA,而且具有高转染效率(转染效率大于80% ) ,较长时间的持续效应和较为明显的蛋白敲减效果。本次实验将构建的siRNA2Med19慢病毒载体转入人肺癌A549细胞,研究其对Med19基因转录和表达的抑制作用。外科手术一直以来是肺癌综合治疗的最重要的手段之一。虽然手术技术及方式进步很快,但对提高生存率的作用有限, 放化疗效果同样不佳,故人们正在寻求疗效更好,毒性更低的治疗方案以提高患者生活质量。 siRNA介导的RNAi技术是近年发展起来的一个崭新的研究领域,它的发现为基因功能探索、基因治疗提供了一种全新、高效的研究手段。RNAi技术因其特异性和高效性已成为研究基因功能的重要工具〔1〕,具有其他基因封闭技术无法比拟的特点和优势〔2〕。siRNA又被称为转录后基因沉默〔3〕,其机制是细胞内的dsRNA被Dicer (一种RNA酶Ⅲ)剪切成双链的 siRNA , 与RNA诱导的基因沉默复合物结合,降解与之互补的靶mRNA,特异性抑制靶基因表达〔4〕。自Fire等〔4〕发现dsR2 NA能引起特异性基因沉默以来, RNAi技术因有望成为理想的基因转移载体。有实验报道使用慢病毒载体稳定介导基因沉默达25 d之久〔5, 6〕。也有实验采用慢病毒载体成功转染了一些包括原代细胞、终末分化细胞等难以转化的细胞,适合于对目的基因进行较长时间的研究〔7〕。 Med的细胞外功能包括促进激活的转录、增强基础转录、增强(CTD)的磷酸化。Med19在酵母菌的曾用名为ROX3 (或 SSN7、RMR1等) ,酵母菌及人类的Med在结构和功能上惊人地保守〔8〕。Med19在人类编码的基因名为肺癌转移相关蛋白 (LCMR1) 。LCMR1基因直接或间接参与和介导了多种信号途径,在具有高转移能力的人肺癌95D细胞系中高表达。但真核生物转录调控的情况相对复杂,除了复杂的原核染色质结构外,真核调节蛋白与RNA聚合酶的相互作用还需要多个亚基组成的蛋白质复合体,即Med 来介导形成全酶才能完成转录〔9〕。含有不同激酶组件的Med复合物可对不同类型的基因起到调节作用〔10〕。Med的构象改变会产生一个对RNA聚合酶 Ⅱ在内的P IC组件进行募集和组装的表面,这是Med在转录调解中发挥作用的重要方面〔11〕。我们构建siRNA2Med19慢病毒表达载体,利用RNAi技术沉默肺癌细胞中Med19基因,可诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞生长、为后续实验及其在肺癌治疗中的应用提供了理论依据。通过siRNA来介导RNAi干扰作用,从而抑制肿瘤组织中 Med19基因的表达,对于治疗肺癌可能具有重要意义。慢病毒通过病毒衣壳糖蛋白与细胞膜上的特异受体结合而进入易感靶细胞。病毒RNA逆转录合成双链线性DNA而转运至细胞核。线性病毒DNA永久性地整合入染色体DNA (宿主基因组)中,形成前病毒,在细胞周期中与靶细胞基因一样复制,并稳定表达与传给子代细胞。本研究针对人肺癌A549 细胞 Med19基因构建siRNA慢病毒为载体,将该载体导入A549细胞内持续表达,细胞生长速度明显减慢,提示RNAi抑制Med19 基因表达后可以显著抑制A549细胞增殖能力。通过RT2PCR、 Western印迹等方法,证实siRNA2Med19成功地抑制了人肺癌 A549细胞内Med19 mRNA和蛋白的表达,为后期研究Med19 基因在人NSCLC中的作用机制和基因治疗打下基础。
 (责任编辑：肺癌公共医学网)您也许会了解：肺癌晚期|小细胞肺癌 |
